NK培養(yǎng)基是為哺乳生物來(lái)源的NK細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的，培養(yǎng)基包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物、激素、生長(zhǎng)因子、微量礦物質(zhì)、血清替代物以及其他補(bǔ)給成分。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，無(wú)病毒和支原體，性能穩(wěn)定的核心是采用無(wú)血清替代物為細(xì)胞提供一個(gè)營(yíng)養(yǎng)全面和平衡的環(huán)境，不僅包括NK細(xì)胞生長(zhǎng)的一切養(yǎng)分，還包括促進(jìn)DC細(xì)胞吸附、活化、增殖的添加物，產(chǎn)品適用于人及哺乳類動(dòng)物NK細(xì)胞的培養(yǎng)、活化及增殖。
NK培養(yǎng)基產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、培養(yǎng)性能*，支持高密度NK細(xì)胞培養(yǎng)；
2、可以培養(yǎng)純度比較低的細(xì)胞樣品，培養(yǎng)獲得高純度的NK細(xì)胞（CD56+/CD3-）；
3、如果培養(yǎng)時(shí)添加病人自體血漿，效果更為顯著；
4、經(jīng)過(guò)微生物檢測(cè)（細(xì)菌、真菌、霉菌及支原體）、pH檢測(cè)、滲透壓和內(nèi)毒素檢測(cè)；
5、不含任何動(dòng)物源的蛋白成分。
NK培養(yǎng)基培養(yǎng)操作步驟
1、培養(yǎng)皿的包被：按一個(gè)10-cm培養(yǎng)皿的表面積計(jì)算，將2mlAdvCell細(xì)胞墊(BCP0001)與20lAdvCellNK細(xì)胞附物(BNKA001)混合后加入培養(yǎng)皿中，4℃下包被過(guò)夜。
2、按常規(guī)免疫細(xì)胞培養(yǎng)的一般準(zhǔn)則，如需在生物反應(yīng)器或培養(yǎng)袋中高密度培養(yǎng)，應(yīng)優(yōu)化條件來(lái)確定操作步驟。使用前將BNSFM0001中的5種組分按如下體積比在37℃下解凍之后混合混合成*培養(yǎng)基:500mlAdvCell免疫細(xì)胞基本培養(yǎng)基（BICBM0001）、20mlAdvCell免疫細(xì)胞添加物A（BICS0001A）、1mlAdvCell免疫細(xì)胞添加物B（BICS0001B）、1mlAdvCellNK細(xì)胞添加物A(BNKS001A)、1mlAdvCellNK細(xì)胞添加物B(BNKS001B)。
3、抽取患者外周血50ml，將采集的血樣轉(zhuǎn)入50ml離心管，2000rpm離心10min。離心結(jié)束后，用移液器吸取上層淡黃色血清于新的50ml離心管，蓋好離心管蓋于40℃水浴鍋中孵育30min。孵育結(jié)束后，再1400rpm(340g)離心10min,吸取上清于新的離心管保存4℃?zhèn)溆谩?/div>
4、用移液管將下層的血細(xì)胞與生理鹽水1:1混勻，按1：1將懸液緩慢加入裝有淋巴細(xì)胞分離液的離心管（注意：不要打亂液面分界保持液面分層明顯）。將離心機(jī)的升速與降速調(diào)至低，400g離心30min；離心結(jié)束后，用5ml移液管吸取中間白膜層于新的50ml離心管，并用生理鹽水洗滌離心兩次，以去除多余血細(xì)胞。
5、根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果調(diào)整細(xì)胞濃度，充分混勻后按1-2×106/ml密度接種于含免疫細(xì)胞基本培養(yǎng)基（BICBM0001）的培養(yǎng)瓶中，并按10-cm培養(yǎng)皿的表面積添加20lAdvCellNK細(xì)胞添加物B（BNKS001B）。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到第三天離心換液（340g離心10min）更換新鮮培養(yǎng)基及AdvCellNK細(xì)胞添加物B。
6、以后4-6天每天鏡檢觀察，根據(jù)細(xì)胞懸液顏色添加培養(yǎng)液，每次添加應(yīng)為總體積的三分之一左右。第七天計(jì)數(shù)，當(dāng)細(xì)胞量大于6×107時(shí)，則添加AdvCellNK細(xì)胞添加物B；如細(xì)胞數(shù)量在3-6×107時(shí)，則長(zhǎng)至第八天添加AdvCellNK細(xì)胞添加物B，加液時(shí)使總細(xì)胞濃度保持在1-1.5×106cell/ml。
7、當(dāng)培養(yǎng)液體積大于150ml或細(xì)胞數(shù)量大于1.5×108時(shí)則需轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)袋培養(yǎng)（氣泡盡量排空，以免影響細(xì)胞生長(zhǎng)）。第8-11天每天鏡檢觀察計(jì)數(shù)，根據(jù)細(xì)胞懸液顏色加培養(yǎng)液。第12-14天觀察需加液時(shí)，細(xì)胞濃度需保持在2×106cell/ml。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到所需劑量時(shí)，即可離心收集細(xì)胞待用。
以上就是NK培養(yǎng)基的產(chǎn)品特點(diǎn)和七個(gè)培養(yǎng)步驟介紹，給大家參考，并希望有所幫助！
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